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攻略 色谱流动相使用不当引发的诸多问题你中了几招……

发布日期:2020-07-31      浏览次数:311

流动相相当于液相色谱系统的血液,可以想象流动相在整个分离过程中的重要程度。那么流动相在具体应用过程中都需要注意什么呢?

01过滤溶剂

溶剂在使用前一定要用0.5μm的过滤器过滤,如果使用固体化学试剂(缓冲盐)配制流动相,过滤特别重要,不能让固体微粒污染泵,阻塞进样器和柱头过滤片。本实验室有水溶性和脂溶性两种过滤膜供选择(反光面朝上),过滤水溶性流动相时(如甲醇/水),先用1~2mL甲醇润湿过滤膜,有助于快速抽滤。

02保持储液瓶的清洁

用普通溶剂瓶作流动相储液器应不定期废弃瓶子,后一次应用HPLC级的水或溶剂清洗,不能在清洗过程中留下污迹。

03保证溶剂的质量

一定要用HPLC级的溶剂,水也应达到HPLC级,同样也要使用高纯度的缓冲盐。

一些流动相引起的常见

01 流动相脱气不充分

 流动相受热,或者流动相不同组分混合时会有气体产生,气泡进入泵内引起压力波动,增加噪音,色谱图上出现毛刺。可试用下列方法解决问题:流动相再脱气;采用更有效的脱气方法或两种方法配合使用;改系统内混合为系统外预混合。

02 流动相供给不畅

 流动相用完,管道中吸入气体引起泵压力不稳。应经常观察储液器中流动相的量,加足流动相保证所有的样品分析完毕。输液管道上装沉子沉至瓶底,储液器盖上留一小孔正好夹住进液管,使其不能上下移动。

    过滤器阻塞引起管道和泵腔空化,压力不稳。过滤器被微粒所阻塞或长霉,去掉过滤器后如果系统运转正常,说明已找出问题,换上新的过滤器则可。有时候换上新的过滤器仍然不畅,那就需要查查流动相的制备过程,或者换大孔径的过滤器。不管如何,流动相都需要重新过滤。

    流速过高、阻力大,造成空化现象,这是由于过滤器孔径、管道内径、流速和溶剂黏度等引起的。如果流速大于10mL/min,常会出现这种现象。

  解决方法如下:

    (1)使用低流速;

    (2)换大孔径的过滤器;

    (3)增加进液管道内径;

    (4)抬高或加压储液器;

    (5)不用过滤器,但流动相一定要先过滤;

    (6)储液器盖子太紧,在储液器内形成真空,打出的流动相不连续。应松开盖子或留有1mm的缝隙;

    (7)进液管道阻塞或弯曲使泵抽不到液,注意调整进液管道或更换新的。其它问题包括渗漏或接头松动、泵部件损坏等,都能引起供液不正常。

03 流动相和储液器被污染

   由于污染,噪音越来越大,检测器基线上升。污染物可能被泵以稳定的浓度打入系统,而再以稳定的浓度流出来,所以在色谱图中不出多余的峰。用梯度洗脱时弱流动相可以使污染物聚在柱顶,流动相强度增加后污染物可能被洗脱出来一个大的伪峰。有时基线噪音突然增大或突然提高,都是因为反复加进新的流动相或系统用得太久(通宵)所造成的。新加进的流动相有污染物或者流动相长霉,繁殖了细菌。

     脏的储液器会污染清洁的流动相。每种流动相备有的储液器,或者定期报废储液器。

04 流动相污染原因及解决方法

  试剂质量不高,玻璃器皿不合格; 因此要求高纯度化学试剂和HPLC级溶剂;玻璃器皿按规定清洗干净。

    微生物的影响; 为防止微生物生长,每天要用甲醇清洗系统;怀疑系统内生长了微生物,可用稀硝酸冲洗即可(注意不要损坏柱和管道系统)。

    配制流动相时操作不当等; 真空脱气时防止泵油带入流动相;用清洁的惰性塞子、搅棒、过滤器和玻璃器皿配制流动相。

    已经污染的流动相一定要废弃掉。

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