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荧光检测器的两个特征光谱

发布日期:2020-08-07      浏览次数:353

  荧光检测器(Fluorescence Detector,简称FLD)是 高压液相色谱仪常用的一种检测器。选择性高,灵敏度也高。激发波长和发射波长是荧光检测的必要参数。选择合适的激发波长和发射波长,对检测的灵敏度和选择性都很重要,尤其是可以较大程度地提高检测灵敏度。

  荧光涉及光的吸收和发射两个过程,因此任何荧光化合物,都有两种特征的光谱:激发光谱(excitation spectrum)和发射光谱(emission spectrum)。

  激发光谱

  荧光属于光致发光,需选择合适的激发光波长(Ex)以利于检测。激发波长可通过荧光化合物的激发光谱来确定。激发光谱的具体检测办法是通过扫描激发单色器,使不同波长的入射光激发荧光化合物,产生的荧光通过固定波长的发射单色器,由光检测元件检测。终得到荧光强度对激发波长的关系曲线就是激发光谱。在激发光谱曲线的大波长处,处于激发态的分子数目多,即所吸收的光能量也多,能产生至强的荧光。当考虑灵敏度时,测定应选择大激发波长。

    发射光谱

  一般所说的荧光光谱,实际上仅指荧光发射光谱。它是在激发单色器波长固定时,发射单色器进行波长扫描所得的荧光强度随荧光波长(即发射波长,Em)变化的曲线。荧光光谱可供鉴别荧光物质,并作为荧光测定时选择合适的测定波长的依据。

  另外,由于荧光测量仪器的特性,使光源的能量分布、单色器的透射率和检测器的响应等性能会随波长而变,所以同一化合物在不同的仪器上会得到不同的光谱图,且彼此间无类比性,这种光谱称为表观光谱。要使同一化合物在不同的仪器上能得到具有相同特性的荧光光谱,则需要对仪器的上述特性进行校正。经过校正的光谱称为真正的荧光光谱。

  激发波长和发射波长是荧光检测的必要参数。选择合适的激发波长和发射波长,对检测的灵敏度和选择性都很重要,尤其是可以较大程度地提高检测灵敏度。

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