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蛋白质检测液相色谱仪的工作原理和要求

发布日期:2021-04-14      浏览次数:90
   蛋白质检测液相色谱仪的工作原理:
  系统由储液器、泵、进样器、色谱柱、检测器、记录仪等几部分组成。储液器中液相色谱仪的流动相被高压泵打入系统,样品溶液经进样器进入流动相,被流动相载入色谱柱(固定相)内,由于样品溶液中的各组分在两相中具有不同的分配系数,在两相中作相对运动时,经过反复多次的吸附-解吸的分配过程,各组分在移动速度上产生较大的差别,被分离成单个组分依次从柱内流出,通过检测器时,样品浓度被转换成电信号传送到记录仪,数据以图谱形式打印出来。
 
  对蛋白质检测液相色谱仪的要求
  1.使用缓冲溶液时,做完样品后应立即用去离子水冲洗管路及柱子一小时,然后用甲醇冲洗40分钟以上,以充分洗去离子。对于柱塞杆外部,做完样品后也必须用去离子水冲洗20mL以上。
 
  2.长时间不用仪器,应该将柱子取下用堵头封好保存,注意不能用纯水保存柱子,而应该用有机相,因为,纯水易长霉。
 
  3.流动相必须用HPLC级的试剂,使用前过滤除去其中的颗粒性杂质和其他物质。
 
  4.流动相过滤后要用超声波脱气,脱气后应该恢复到室温后使用。
 
  5.不能用纯乙腈作为流动相,这样会使单向阀粘住而导致泵不进液。
 
  6.C18柱不能进蛋白样品,血样、生物样品。
 
  7.堵塞导致压力太大,按预柱→混合器中的过滤器→管路过滤器→单向阀检查并清洗,清洗方法:
  ①以异丙醇作溶剂冲洗;
  ②放在异丙醇中间用超声波清洗;
  ③用10%稀硝酸清洗;
 
  8.每次做完样品后应该用溶解样品的溶剂清洗进样器。
 
  9.要注意柱子的pH值范围,不得注射强酸强碱的样品,特别是碱性样品。
 
  10.气泡会致使压力不稳,重现性差,所以在使用过程中要尽量避免产生气泡。
 
  11.如果进液管内不进液体时,要使用注射器吸液:通常在输液前要进行流动相的清洗。
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